Diabetologia：激活但功能毁损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次经常出新现口内自身病原体到经常出新现1M-冠心病诊断病征的成果率在儿童时期就有很好的阐述，多个口内自身病原体无症状的儿童里有70%在肝脏变换后10年内患上冠心病，而随访15年的儿童这一比例减极多到84%。比起之下，占诊断1M-冠心病一半以上的M-1M-冠心病的中风组态还没有得不到充份的学绝技研究。

更为多的人开始适用分期该系统来判别1M-冠心病的成果：母体在经常出新现多种口内自身病原体时踏入第1先决条件，经常出新现血糖极其时踏入第2先决条件，经常出新现病征时踏入第3先决条件。一些多发口内自身病原体无症状的母体，在1期和2期，成果速度快，并发展为中风的1M-冠心病。我们之前阐述了组合成在首次监测到多种口内自身病原体样本后仅仅10年无冠心病的短短时间成果者，这组症状人口数极多，但特征比较完全一致。随后，我们找到口内自身病原体特异性CD8+T细胞内质子化在成果极快的症状里基本不共存，但在近期中风和长短时间共存的冠心病症状里很不易监测到。这不太可能表明，与成果症状比起，这些症状自身免疫质子化的平衡增强。

以前学绝技研究表明，尽管平衡性T细胞内(Treg)生产量正常，但冠心病症状共存一些机能缺陷，其里都有对IL-2的质子化灵活性减缓。此外，冠心病症状里的物理现象CD4+T细胞内不太可能对平衡更加具抵抗性，展示出为物理现象T细胞内的依赖性逼近，自然消除的Treg和游离消除的诱发Treg，以及病原体随之而来的CD4+T细胞内里IL-2质子化逼近。本学绝技研究的目的是阐述了CD4+平衡性T细胞内(Treg)在一小群极极快成果者里的特征，他们的平均成年人为43岁(31-72岁)，随访短时间为18-32年。

方法：BOX学绝技研究是一项以年轻人为基础的纵向学绝技研究，在21岁以下胃癌的症状亲属里检查1M-冠心病的危险因素。我们之前阐述了长短时间极快成果者的特征，他们保持多重口内自身病原体无症状超过10年，但没有经常出新现冠心病的诊断病征，快性或非透过性自身免疫。随后，10名继续保持无冠心病并愿意提供大量体液样本的极快成果者设为T和B细胞内机能数据分析。在现有的学绝技研究里，8名快成果者(SP组)，里位成年人43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的口内自身病原体无症状。所有的大多数人都处于1M-冠心病成果的1期，尽管一些人随后丧失了口内自身病原体对某些病原体的无症状质子化，然而，一名症状早已处于2期仅仅6年，但没有经常出新现诊断病征，一名症状被诊疗为冠心病，该病人72岁，在挖掘出实验样本时，其HbA1c升温到53 mmol/mol(7%)，在数据数据分析里对该酪氨酸透过了实际上指标。分离外周血单个核细胞内(PBMCs)，采用多常量流式细胞内绝技和T细胞内依赖性试验指标酪氨酸里Treg的增益、表M-和机能。适用FlowSOM和CITRUS(聚类深入研究、表征和回归)透过无行政官员聚类数据分析，指标Treg表M-。

结果：与健康酪氨酸比起，来自快成果体的知觉CD4+T细胞内的行政官员聚类说明了，启动时的知觉CD4+ Treg增益减极多，与糖皮质激素诱发的TNFR相关蛋白(GITR)强调减极多有关。一名HbA1c升温的症状与成果极快者和比如说的相比较组比起，Treg明人有所不同。机能相比较，与健康酪氨酸比起，来自极快成果体的Treg介导的CD4+物理现象T细胞内依赖性明显受损。展示出为对物理现象CD4+T细胞内CD25和CD134强调的依赖性减极多。

所示1 侧重的表M-数据分析说明了，CD4+Treg亚M-在快成果字段里减极多。由FlowSOM分解的Treg室，聚集在来自所有酪氨酸的活CD4+CD45RA -细胞内上。根据标明物强调深入研究出新10个元簇:知觉T细胞内_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;知觉T cell_4;CD49b知觉T细胞内;HLA-DR + GITR +知觉T细胞内;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)适用9个不同Treg标明分解的10个元簇的MST。每个键值都是一个战斗群(100个战斗群)，更加大的元战斗群(10个元战斗群)在键值组周围剪裁。每个键值里的点心所示透露单个标明的强调层级。(b)每个元聚类的热所示，以说明了整体而言标明强调。(c, d)为HD组(c)和SP组(d)分解所示，以及FlowSOM标识的每个元簇的覆盖层。(e-l)比起较丰度为每个metacluster箱内该线所示(丰度> 0.05%)确定为HD和SP组:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +知觉T细胞内(h)、知觉T cell_1(i),知觉T cell_2 (j),知觉T cell_3 (k) n d CD49b知觉T细胞内(l)。红色圆圈都是**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon相加记号秩检验。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 适用CITRUS的预测模M-证实，Treg增益的减极多是成果极快的标志。国际标准暂时性(a - f)和柑橘数据分析(g-k)比较SP大多数人和比如说的HD大多数人在CD4+CD45RA−T细胞内上的不同。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会性的都是性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR强调透过分离，模拟FlowSOM社会性。(b) HD(黑点)和SP(黑斑)组以及酪氨酸SP 606(红色)里CD25+ cd127的增益概要所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+暂时性闭包的箱内该线所示;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)油菜簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3强调强度着色，箭头醒目新的簇被标识为SP和HD字段之间的不同。(j)箱内该线所示说明了了在SP(黑斑)和HD(灰点)组里，CITRUS知觉Treg_3和Treg_4的比起较丰度(比例)。(k)直方所示说明了每个簇的表M-(粉红色)和Treg标明比起较强调与时代背景强调(黄色);上列，闪存Treg_3;下面一路上，闪存Treg_4。时代背景与所有其他簇里标明的强调有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon相加记号秩检验

所示3 与健康献血者比起，成果极快者知觉treg的GITR减极多。每个知觉CD4+T细胞内元簇(知觉T细胞内_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;CD49b +知觉T细胞内;HLA-DR + GITR +知觉T细胞内;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)监测每个强调标明的转变。(a,b)来自HD (a)和S (b)字段的强调热所示(sp606不都有在内)。(c,d)知觉Treg_4元簇里所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(红色)的FlowSOM GITR强调串联，说明了直方所示(c)和概要所示(d)。Wilcoxon相加记号秩和检验，p< 0.07(红色)所有酪氨酸都有，p< 0.05(黄色)酪氨酸SP 606和比如说的HD不都有在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR强调，从国际标准暂时性，从所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(红色)串联，说明了直方所示(e)和概要所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon相加记号秩检验

所示4 来自极快成果的CD4+ treg细胞内控制物理现象CD4+T细胞内的灵活性减缓。SP组用黄色的该线和圆圈透露，HD组用黑色的该线和圆圈透露，红色的该线/圆圈透露酪氨酸sp606。适用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内透过分选。CD4+CD25−(此番者)被标明为CFSE, Treg按观察的比例反应物。用抗CD3 /28微珠酪氨酸细胞内，养成3同一天透过流式细胞内绝技监测。(a-d)与CD4+此番者比起较应的treg养成(内皮)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD此番者养成。(a,b,f) CFSE游离(a,e)和CFSE依赖性%-(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性%-。适用无症状相比较(启动时的拥护细胞内内含treg)算出依赖性%-。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

所示5 物理现象CD4+T细胞内对极快成果的T细胞内酪氨酸的依赖性更加敏感。SP组用黄色的该线和圆圈透露，HD组用黑色的该线和圆圈透露，红色的该线/圆圈透露酪氨酸sp606。适用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内透过分选。CD4+CD25−(此番者)被cfsel标明，treg按观察的比例反应物。用抗CD3 /28微珠酪氨酸细胞内，养成3同一天透过流式细胞内绝技(CD25反染)和细胞内因子数据分析。HD Treg与HD、SP或sp606此番者共同养成。(a,b) CFSE游离(a)和CFSE依赖性三份(b)。(c,d) CD25依赖性三份(c)和CD134依赖性三份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共养成里的强调。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们算出新的结论是，来自极快成果子的酪氨酸知觉CD4+Treg在GITR强调里得不到了拓展和丰富，强调了大幅度学绝技研究Treg在1M-冠心病风险母体里的值得注意的重要性。

书名出新处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28