Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的流程中逐渐扩展

从第一次用到去甲自身抗本体到用到1型号冠心病诊疗症状的实质性率在老年人末期就有很好的描述，多个去甲自身抗本体感染性的老年人之中有70%在血浆转化后10年内患上冠心病，而随访15年的老年人这一%-增加到84%。相比之下之下，占诊疗1型号冠心病一半以上的型号1型号冠心病的肺癌机制还没有得到充分的研究成果。

越来越多的人开始用于分期系统来定义1型号冠心病的实质性：个本体在用到多种去甲自身抗本体时进入第1先决条件，用到血糖极度时进入第2先决条件，用到症状时进入第3先决条件。一些多发去甲自身抗本体感染性的个本体，在1期和2期，实质性较极快，并持续发展为肺癌的1型号冠心病。我们以后描述了一两组在首次验证到多种去甲自身抗本体比对后至再加10年无冠心病的极极快实质性者，这两组病征次数再加，但相似性非常一致。随后，我们发现去甲自身抗原特异性CD8+T细胞会反应会在实质性缓极快的病征之中基本上不存在，但在近期肺癌和长年存在的冠心病病征之中很容易验证到。这可能会断定，与实质性病征相比之下，这些病征自身病原体的平衡提高。

早期研究成果断定，尽管平衡性T细胞会(Treg)数量正常，但冠心病病征存在一些机制缺陷，其之中有数对IL-2的反应会能力降低。此外，冠心病病征之中的畸变CD4+T细胞会可能会对平衡更具抵抗性，观感为畸变T细胞会的抑止减弱，其本质激发的Treg和本人体内激发的诱发Treg，以及抗原经历的CD4+T细胞会之中IL-2反应会减弱。本研究成果的目的是描述了CD4+平衡性T细胞会(Treg)在一小群极缓极快实质性者之中的相似性，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究成果是一项以个体为基础的纵向研究成果，在21岁以下确诊的病征亲属之中检验1型号冠心病的有可能因素。我们以后描述了长年缓极快实质性者的相似性，他们保持多重去甲自身抗本体感染性超过10年，但没有用到冠心病的诊疗症状，极快性或非透过性自身免疫。随后，10名继续保持无冠心病并愿意提供大量肾脏比对的缓极快实质性者纳入T和B细胞会机制分析。在迄今的研究成果之中，8名极快实质性者(SP两组)，之中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的去甲自身抗本体感染性。所有的参与者都受制于1型号冠心病实质性的1期，尽管一些人随后失去了去甲自身抗本体对某些抗原的感染性反应会，然而，一名病征已经受制于2期至再加6年，但没有用到诊疗症状，一名病征被诊断为冠心病，该受试者72岁，在采自实验比对时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据分析之中对该供本体透过了单独审计。分离外周血单个核细胞会(PBMCs)，采用多参数流式细胞会练成和T细胞会抑止试验审计供本体之中Treg的高频率、表型号和机制。用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)透过无监理聚类分析，审计Treg表型号。

结果：与身体健康供本体相比之下，来自极快实质性本体的清醒CD4+T细胞会的监理聚类看出，启动时的清醒CD4+ Treg高频率增加，与抑制作用诱发的TNFR相关蛋白(GITR)表达出来增加有关。一名HbA1c升高的病征与实质性缓极快者和匹配的对应两组相比之下，Treg谱有所并不相同。机制分析断定，与身体健康供本体相比之下，来自缓极快实质性本体的Treg介导的CD4+畸变T细胞会抑止明显受损。观感为对畸变CD4+T细胞会CD25和CD134表达出来的抑止增加。

三幅1 深入的表型号分析看出，CD4+Treg亚型号在极快实质性描述符之中增加。由FlowSOM生成的Treg寝室，聚集在来自所有供本体的活CD4+CD45RA -细胞会上。根据记号物表达出来鉴定出10个元簇:清醒T细胞会_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T细胞会;HLA-DR + GITR +清醒T细胞会;该线程Treg_1;该线程Treg_2;该线程Treg_3;和该线程Treg_4。(a)用于9个并不相同Treg记号生成的10个元簇的MST。每个路由器代表一个一个大(100个一个大)，大得多的元一个大(10个元一个大)在路由器两组周围着色。每个路由器之中的点心三幅回应单个记号的表达出来级别。(b)每个元聚类的热三幅，以看出整本体记号表达出来。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)生成三幅，以及FlowSOM辨识的每个元簇的孔洞。(e-l)相比之下较同位素为每个metacluster箱子该线三幅(同位素> 0.05%)考虑到为HD和SP两组:该线程Treg_2 (e),该线程Treg_3 (f),该线程Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T细胞会(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T细胞会(l)。浅蓝色边框代表这些年来SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon以此类推符号秩验证。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 用于CITRUS的预测模型号得出结论，Treg高频率的增加是实质性缓极快的标志。分级门控(a - f)和柑橘分析(g-k)比较SP参与者和匹配的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞会上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群本体的指标性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3非金属，然后通过HLA-DR和GITR表达出来透过分离，模拟FlowSOM群本体。(b) HD(黑点)和SP(星点)两组以及供本体SP 606(浅蓝色)之中CD25+ cd127的高频率汇总三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控有界的箱子该线三幅;(c) HLA-DRloGITR−(该线程Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(该线程Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(该线程Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+该线程T cell)。(g - i)柑桔簇棒状由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表达出来数值图例，对角突出的簇被辨识为SP和HD描述符之间的并不相同。(j)箱子该线三幅看出了在SP(星点)和HD(灰点)两组之中，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的相比之下较同位素(%-)。(k)直方三幅看出每个簇的表型号(粉红色)和Treg记号相比之下较表达出来与背景表达出来(白色);上列，该线程Treg_3;下面一路上，该线程Treg_4。背景与所有其他簇之中记号的表达出来有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon以此类推符号秩验证

三幅3 与身体健康献血者相比之下，实质性缓极快者清醒treg的GITR增加。每个清醒CD4+T细胞会元簇(清醒T细胞会_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T细胞会;HLA-DR + GITR +清醒T细胞会;该线程Treg_2;该线程Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验证每个表达出来记号的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)描述符的表达出来热三幅(sp606不有数在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇之中所有HD(灰色)、所有SP(白色)和SP 606(浅蓝色)的FlowSOM GITR表达出来联接，看出直方三幅(c)和汇总三幅(d)。Wilcoxon以此类推符号秩和验证，p< 0.07(浅蓝色)所有供本体有数，p< 0.05(白色)供本体SP 606和匹配的HD不有数在测试之中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之中GITR表达出来，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(白色)和SP 606(浅蓝色)联接，看出直方三幅(e)和汇总三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon以此类推符号秩验证

三幅4 来自缓极快实质性的CD4+ treg细胞会控制畸变CD4+T细胞会的能力降低。SP两组用白色的该线和边框回应，HD两组用黑色的该线和边框回应，浅蓝色的该线/边框回应供本体sp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会透过分选。CD4+CD25−(这样的话者)被记号为CFSE, Treg按掩蔽的%-指示剂。用抗CD3 /28微珠激活细胞会，培养3天后透过流式细胞会练成验证。(a-d)与CD4+这样的话者相比之下较应的treg培养(自本体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者培养。(a,b,f) CFSE诱发(a,e)和CFSE抑止百份(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止百份。用于感染性对应(启动时的声势浩大细胞会不含treg)计算抑止百份。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

三幅5 畸变CD4+T细胞会对缓极快实质性的T细胞会激活的抑止更恰当。SP两组用白色的该线和边框回应，HD两组用黑色的该线和边框回应，浅蓝色的该线/边框回应供本体sp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会透过分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel记号，treg按掩蔽的%-指示剂。用抗CD3 /28微珠激活细胞会，培养3天后透过流式细胞会练成(CD25反染)和细胞会因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者共同培养。(a,b) CFSE诱发(a)和CFSE抑止前年(b)。(c,d) CD25抑止前年(c)和CD134抑止前年(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养之中的表达出来。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们证明了的结论是，来自缓极快实质性子的激活清醒CD4+Treg在GITR表达出来之中得到了扩展和丰富，强调了进一步研究成果Treg在1型号冠心病风险个本体之中的关联性的必要。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28